Primjena voges-proskauerove reakcije na mikrobiološku diferencijaciju enterobakterija

U diferencijalnoj definiciji enterobakterija i nekih Vibrio, Voges-Proskauerova reakcija zauzima posebno mjesto. Test se temelji na sposobnosti bakterija da fermentiraju glukozu i tvore acetoin.

Bit procesa istraživanja

U mikrobiologiji se Voges-Proskauerova reakcija često koristi za razlikovanje unutar obitelji enterobakterija iersinija (uključujući patogene pseudotuberkuloze i enterokolitisa), E. coli, aerobi koji stvaraju spore. Rezultat se vizualizira bojanjem medija u boji kada se dodaju određeni reagensi.

Ovaj se test odnosi na seriju AMAP (kratica AMAP, AMAP, AMAP-a) - skupinu identifikacijskih testova koji uključuju diferencijalne definicije:

• s indolom koji se temelji na razgradnji triptofana u indol, koristi se u prisutnosti kovacsovog ili Ehrlichovog reagensa;
• uz primjenu metilrota, ili metil crvenog, koji detektira unaprijed određeni mine kao rezultat metabolizma glukoze;
• Voges-Proskauerove reakcije na detekciju acetil-metilkarbinola;
• recikliranje citrata C promjena boje kao rezultat alkalizacije medija.

Bit procesa je vizualizacija prisutnosti dijagnosticiranih bakterija zbog interakcije acetoina koji oni tvore s kaustičnim kalijem u prisutnosti kisika. Dolazi do oksidacije acetil-metilkarbinola u diacetil, koji tvori spoj svijetlocrvene ili ružičaste boje. Povećajte osjetljivost testa uvođenjem alfa-naftola prije primjene kaustičnog kali.

Postavljanje testa

Postavljanje Voges-Proskauerove reakcije uključuje predkulturu mikroorganizama. Čista kultura se sije na Clarkov diferencijalni dijagnostički medij, čija je varijacija Clarkova juha (bez dodavanja agar-agara). Koristi se ili gotovi medij ili se priprema samostalno. Sastav uključuje:

• 5 g peptona;
• 5 g glukoze;
• 5 g dvobaznog kalijevog fosfata;
• 1 l destilata.

Tijekom studije kultura se sije sterilnom bakteriološkom petljom u tekući medij. Količina - 5 ml u epruveti Plus kontrola. Inkubacija se provodi na temperaturi od 35-37 stupnjeva dva dana. Zatim se u fazama provodi studija Voges-Proskauerove reakcije:

1. 2,5 ml kulture u juhi prenosi se u sterilnu epruvetu.
2. Nanesite šest kapi Alfa-naftola (5% alkoholna otopina).
3. Dodajte 40% otopinu kaustičnog kalija u količini od 0,1 ml ili dvije kapi.
4. Miješanje se vrši pažljivim protresanjem epruvete.
5. Rezultat se procjenjuje nakon 15 minuta od početka eksperimenta.

Alternativna metoda ispitivanja je noćna inkubacija, čije se vrijeme smanjuje na 18 sati ili do jednog dana. Osim ove metode, koristi se i brzi test: kultura se uvodi u petlju u 2 ml medija, inkubira oko četiri sata, zatim se dodaju reagensi u jednakoj količini od 2-3 kapi, miješaju i procjenjuju rezultat nakon deset minuta.

Kontrola je jedan od uzročnika pneumonije, soj, soj, soj, 13883.

Procjena ishoda

Nakon potrebnog vremena nakon dodavanja reagensa (od 5 do 15 minuta), treba primijetiti trešnjasto-crvenu boju s izraženom pozitivnom reakcijom, crvenu i ružičastu-sa slabom pozitivnom. Nedostatak promjena registrira se kao negativan rezultat.

Višak kaustičnog kalija u otopini može proizvesti imitaciju pozitivne reakcije, bojeći bakrenu boju. U tom slučaju treba zabilježiti negativan odgovor testirane kolonije. Također, bojenje bakra pojavljuje se u slučajevima kada se procjena daje sat vremena nakon uvođenja reagensa.

Pri ocjenjivanju rezultata mora se imati na umu da dugotrajno uzgoj ispitivanih mikroorganizama (više od tri dana) dovodi do zakiseljavanja medija, što može dovesti do pogrešnog ishoda studije. Reakcija može biti slabo izražena pozitivna ili lažno negativna.

Zahtjevi reagensa za ispitivanje

Reagensi za provođenje Voges-Proskauerove reakcije moraju udovoljavati zahtjevima kao što su, kako ispravno koncentracija, visok stupanj pročišćavanja i stabilnost koja se postiže poštivanjem propisa o skladištenju.

Gotovi setovi za ispitivanje obično sadrže reagense za 100 ili više primjena i nalaze se u plastičnim ili zatamnjenim staklenim bočicama. Kvaliteta je podesiva relevantna dokumentacija.