Kolorimetrijska metoda kemijskog ispitivanja krvi

Kolorimetrijska metoda-analiza koja se temelji na usporedbi zasićenosti boje ispitivane i poznate tvari. Rezultati fizikalno-kemijskih ispitivanja od velike su vrijednosti za mnoge grane znanosti, ali najviše od svega, studija se primjenjuje u medicini.

Bit kolorimetrijske metode

Postoje mnoge vrste analiza pomoću kojih se određuje kemijski sastav tvari. Neki od njih su univerzalni i široko se koriste u raznim područjima, drugi su specifični, s većom točnošću. Kolorimetrijska metoda odnosi se na univerzalnu.

Bit analize je da se zasićenost boje otopine s nepoznatom koncentracijom uspoređuje s bojom standardne otopine. U procesu analize, kao rezultat interakcije ispitivane komponente s određenim reagensom, nastaje obojeni spoj. Nakon završetka reakcije, dobivena nijansa uspoređuje se s bojom otopina čija je koncentracija već poznata.

Vjeruje se da je utemeljitelj kolorimetrije Robert Boile. Koristio je kominu taninskih orašastih plodova kako bi u otopini razlikovao željezo od bakra. To Je Boil primijetio sam, što je veća koncentracija željeza u otopini, to je ton potonjeg zasićeniji.

Kolorimetrija

Kolorimetrija-metoda za određivanje količine tvari u otopinama. Analiza se temelji na Bouguer-Lambert-Beerovom zakonu: kada snop svjetlosti udari u gusti apsorbirajući sloj tvari, njegov intenzitet slabi.

Kolorimetrijska metoda za određivanje koncentracije tvari može koristiti vizualnu usporedbu ili usporedbu pomoću posebnih instrumenata za mjerenje intenziteta boje. Usporedba se vrši na izravan i kompenzacijski način.

1. Izravno. Metoda uključuje usporedbu razine boje ispitivane otopine pri određenoj gustoći i temperaturi tekućine s referentnom otopinom. Kada se koriste fotokolorimetri i spektrofotometri, destilirana voda koristi se kao referentna otopina. Uređaji mjere jačinu struje koja ovisi o intenzitetu svjetlosti.
2. Kompenzacijski. Metoda se temelji na dovođenju boje uzorka koji se proučava na referentnu. Rezultat se postiže dodavanjem otapala ili povećanjem visine sloja medija koji se boji.

Korištenje spektrofotometra, monokromatora i drugih preciznih instrumenata još više pojednostavljuje već nekomplicirano metoda istraživanja i omogućuje povećanje točnosti rezultata. Ovi instrumenti mogu mjeriti količinu propusnosti svjetlosti i odrediti valnu duljinu.

Gdje se primjenjuje analiza

Kolorimetrijska metoda analize koristi se kada je poznat točan kemijski sastav, postoji referentni uzorak za usporedbu, a temperatura ispitivanog i referentnog uzorka je ista. Ako je potrebno brzo odrediti količinu obojene tvari, ali je toliko mala da je nemoguće primijeniti analitičku metodu.

Kolorimetrija se široko koristi u medicini u kliničkim biokemijskim istraživanjima i drugim područjima:

• farmakološka industrija;
• prehrambena i alkoholna industrija;
• Agronomija (određivanje kvalitete tla).

Prednosti i nedostaci

Kolorimetrijska metoda, kao i svaka druga, ima prednosti i nedostatke.

Prednosti uključuju sljedeće:

• jednostavnost analize, minimalni pripremni postupci;
• mogućnost testiranja čak i uz malu količinu ispitivanog materijala;
• nema potrebe za skupom opremom, iako se u posljednje vrijeme sve više koriste moderni uređaji koji nisu jeftini. Ali pružaju najtočniji rezultat.

Nedostaci: točnost analize je mala u usporedbi s analitičkim metodama.

Biuretska metoda određivanja proteina

Protein u serumu-pokazatelj koji odražava stanje homeostaze. Povećana koncentracija spoj velike molekulske mase u krvi se naziva hiperproteinemija, nizak sadržaj-hipoproteinemija.

Proteini u krvnom serumu imaju različit sastav, strukturu, svojstva, obavljaju različite funkcije. Podijeljeni su na enzime, hormone, imunoglobuline i druge. Sve skupine proteina imaju niz zajedničkih karakteristika na temelju kojih su razvijene metode za određivanje organskih spojeva visoke molekularne težine u biološkim tekućinama.

Od svih metoda u kliničkoj biokemiji najčešće se koriste kolorimetrijske metode za određivanje proteina. Oni su relativno jeftini, što je važno za proračunske organizacije. i dovoljno jednostavno. Najčešća je biuretska metoda. Bit metode: proteini u alkalni medij reagiraju s bakrenim sulfatom i tvore spojeve ljubičaste boje. Sadržaj proteina u krvi određuje se zasićenjem bojenja. Biomaterijal za analizu uzima se ujutro natašte.

Analiza je vrlo točna, ali postoje čimbenici koji utječu na koncentraciju proteina u krvi:

• tjelesna aktivnost neposredno prije uzimanja biomaterijala;
• posljednji tjedni trudnoće i razdoblje dojenja;
• upotreba lijekova "kortikotropin", "Miscleron", "klofibrat" povećava sadržaj proteina u krvi, a upotreba "pirazinamida" i estrogena smanjuje koncentraciju;
• pogrešan položaj ruke tijekom uzimanja biomaterijala.

Definicija željeza

Količina željeza u krvi jedan je od glavnih pokazatelja u dijagnozi različitih bolesti. Tvar je koncentrirana u hemoglobinu koji osigurava transport kisika do tkiva. Za određivanje željeza kolorimetrijskom metodom, otopina batofenantrolina (0,02%)najčešće se koristi kao glavni reagens. Biomaterijal-serum bez tragova hemolize.

Bit metode: tijekom interakcije iona željeznog željeza i sulfatiranog batofenantrolina nastaje obojeni kompleks čija se zasićenost određuje fotometrijski. Da bi se dobila bistra otopina, potrebno je slijediti pravila za prikupljanje biomaterijala, ali za točno određivanje optičkih gustoća kompleksa željezo-ligand željezo se oslobađa iz hemoglobina pomoću hidroksilamina i deterdženata (natrijev dodecil sulfat). Rezultat testa određuje prisutnost i stupanj patologije. Normalno, koncentracija željeza treba biti:

• 14,2-26,0 umol/L (muškarci);
• 10,6-21,7 umol/L (žene).

Nedostatak željeza obično je povezan s gubitkom krvi, nedovoljnim unosom s prehranom ili lošom apsorpcijom u gastrointestinalnom traktu.

Određivanje kolesterola

Kolesterol je organska tvar koja se nalazi u staničnoj ovojnici mnogih organizama, uključujući ljude. On potrebno za proizvodnju kolekalciferol i steroidni hormoni. Razina kolesterola od 3,37-5,2 mmol/l smatra se normalnom. Povećani sadržaj - jedan od glavnih uzroka razvoja ateroskleroze.

Kolorimetrijske metode za određivanje kolesterola omogućuju prepoznavanje vaskularnih bolesti u ranim fazama. Prema postmortalnim rezultatima sa smrtnim ishodom ishemije, koncentracija lipofilnog alkohola u bolesnika bila je 6,5-7,8 mmol / l.

Princip kolorimetrijske metode je da se kolesterol oksidira 3beta-hidroksi-steroid oksidoreduktazom kako bi se oslobodio vodikov peroksid, koji pretvara p-aminoatipirin u obojeni spoj. Zasićenost njegove boje određuje sadržaj kolesterola.

Prilikom provođenja testa kod djeteta mora se imati na umu da koncentracija kolesterola u djetinjstvu ne smije prelaziti 4,1 mmol / l.

Što je enzimska kolorimetrijska metoda?

Enzimski testovi temelje se na korištenju reakcija od strane enzima visoke aktivnosti. Široko se koriste u analitičkoj kemiji za određivanje različitih tvari - od nitratnih iona do makromolekula.

Enzimske (enzimske) metode razlikuju se specifičnošću koja omogućuje analizu nekih tvari u prisutnosti drugih tvari sličnog sastava. Najčešće metode temeljene na primjeni enzima-glukoza oksidaze. Test se koristi za određivanje koncentracije glukoze u krvi. Točnost testa omogućuje da se koristi za prilagodbu doze hipoglikemijskih sredstava u bolesnika s dijabetesom tipa dva.

Metoda oksidacije glukoze smatra se jednim od najboljih kvantitativnih načina za određivanje glukoze. Krv (kapilarna) i serum mogu se koristiti kao biomaterijal, ali plazma je poželjnija jer smanjuje sadržaj hematokrita, što negativno utječe na točnost rezultata.

Uglavnom se primjenjuje kinetička metoda fotometriranja. Njegova suština leži u činjenici da će s utvrđenim omjerom glukoza oksidaze i peroksidaze neko vrijeme nakon početka reakcije brzina stvaranja obojenog spoja biti proporcionalna razini glukoze u uzorku. Glavna prednost testa je što na rezultat ne utječe prisutnost veza trećih strana u uzorku. Metoda također ima nedostatak – za provođenje testa potrebni su skupi mjerni uređaji njemačkih ili švedskih proizvođača.

Zaključak

Kolorimetrijska metoda odlikuje se preciznošću i lakoćom primjene. Njegova uporaba u medicini omogućuje u ranim fazama prepoznavanje različitih patoloških promjena u tijelu. Uvođenjem novih tehnologija metoda se poboljšava i postaje sve traženija.